赭曲霉毒素(OTA)ELISA检测试剂盒产品描述:
一、概要
赭曲霉毒素检测试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代真菌毒素检测产品,操作时间低于60min,能限度地减少操作误差和工作强度。
赭曲霉毒素A是由曲霉菌和青霉属菌株产生的一种有毒真菌次级代谢产物,广泛存在于谷物及谷物产品、香料和咖啡豆等产品中。赭曲霉毒素A具有很强的肝脏和肾脏毒性,并有致畸、致突变和致癌作用,严重危害人类健康。赭曲霉毒素一般用薄层色谱、高效液相色谱法检测, 但因其操作繁杂、费用昂贵而影响实际应用。而使用赭曲霉毒素ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中赭曲霉残留。
二、试验原理
赭曲霉毒素检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被赭曲霉毒素抗原,样本中赭曲霉毒素和此抗原竞争赭曲霉毒素的抗体,酶标二抗催化TMB底物显色,样本吸光值与其含有的赭曲霉毒素成负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中赭曲霉毒素的含量。
三、适用范围
赭曲霉检测试剂盒可定性、定量检测饲料样本中的赭曲霉毒素。
四、交叉反应率
赭曲霉毒素A………………………………………………
赭曲霉毒素B………………………………………………9.3%
赭曲霉毒素C………………………………………………46%
五、检测步骤
测定前应须知:
1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温(20~25℃)。
2、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
3、在ELISA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。
4、在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖板膜封住微孔板。
5、标品里含有赭曲霉毒素,操作时应戴手套操作,避免皮肤接触。
操作步骤:
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封,保存于2~8℃。不要冷冻。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本:加OTA酶标物100ml到对应的微孔中,再加入标准品/样本50ml/孔,加入OTA抗试剂50ml/孔。轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应30min。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液300ml/孔,充分洗涤5次,每次间隔30s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、显色:加入底物液A液50ml/孔,再加底物液B液50ml/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15min~20min。
8、测定:加入终止液50ml/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测,请在5min内读完数据),测定每孔OD值。(若无酶标仪,则不加终止用目测法可进行判定)。
六、检测方法灵敏度、准确度、精密度
试剂盒灵敏度:0.5ppb
检测限:5ppb
回收率:
饲料:75±15%
精密度:
试剂盒的变异系数均小于10%
七、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2~8℃,不要冷冻,将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8、在加入底物液A液和底物液B液后,一般显色时间为15~20min即可。若颜色较浅,可延长反应时间到30min(或更长),但不得超过30min。反之,则减短反应时间。
9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象,请加热溶解后使用。
10、该试剂盒反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
八、贮藏条件及保存期
贮藏条件:保存试剂盒于2~8℃。
保存期:该产品有效期为12个月。